使用指南--细胞培养耗材

规格：T25；T75；T175（均经过TC处理）

PART1：细胞悬液接种到培养瓶

1.细胞悬液混匀：按照实验要求的浓度准备细胞悬液，并在培养基瓶、培养瓶或其他容器中混匀。

2.使用移液管或巴氏吸管将细胞悬液缓慢且平稳地注入细胞培养瓶中，避免液体溅出或产生泡沫。（对于多层细胞培养瓶，需要特别注意液体的均匀分布，可以通过倾斜、旋转等方式使液体均匀流入各层）。

3.将培养瓶轻轻放置于平稳的工作台上，确保光滑平整一面朝上，有梯度一面朝下（堆叠设计，方便搬运）。

4.将细胞培养瓶放置在合适的培养箱中，设置适当的温度（如37℃）、湿度和气体浓度（如5% CO₂）。

5.静置培养一段时间，让细胞在培养瓶中生长。

PART2：细胞液的更换

1.移除旧培养液：抽吸培养液时将瓶身倾斜45度，瓶身光滑一面朝向自己。使用巴氏吸管或移液管轻轻吸出旧的培养液，注意动作要轻柔，避免冲落贴壁的细胞。如果培养液中有较多的悬浮细胞或杂质，可以先用PBS缓冲液洗涤细胞一至二次，以去除这些杂质。

2.加入新培养液：在移除旧培养液后，向培养瓶中加入适量培养液。注意加液时要从培养瓶的侧壁加入，避免直接冲击细胞贴壁面。同时，要根据细胞的密度和生长速度来确定加入新培养液的量，以确保细胞能够正常生长。

PART3:细胞的收集

1.移除旧培养基：轻轻抽吸细胞培养瓶中的旧培养液，加入适量的PBS缓冲液轻轻摇晃，以洗去残留的培养基，确保细胞表面干净。

2.消化和终止细胞：加入适量胰蛋白酶（≥3ml）进行消化2-3min，用含血清的培养基终止胰酶的消化。

3.收集细胞：

用移液管抽吸细胞悬液转移到离心管中（注意避免产生泡沫），放入离心机中，以适当的转速（如800rpm）离心5分钟，使细胞沉淀在离心管底部。

4.收集细胞沉淀：离心结束后，轻轻倒掉离心管中的上清液（注意不要将细胞沉淀倒出）。将离心管中的细胞沉淀收集起来，根据实验需要进行后续处理。

PART4：使用场景